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大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒【Rat Bone PrimacellTM：Normal Osteoblastic Cells】
     大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)骨代謝過程中，成骨細胞和破骨細胞相互協(xié)調(diào)，使骨質(zhì)的形成與吸收處于一種動態(tài)平衡，維持骨骼的不斷更新。其中，成骨細胞是骨形成細胞，對骨組織的生長發(fā)育、骨代謝平衡、骨量平衡和骨損傷修復(fù)起關(guān)鍵作用。體外培養(yǎng)成骨細胞，作為常用的體外實驗?zāi)Ｐ?，成為研究骨生理、病理及修?fù)的重要手段，也成為研究成骨細胞生長代謝及骨組織工程的基礎(chǔ)。 雖然骨組織機械韌性很強，但利用本公司試劑盒中提供的骨組織分離體系來分離，EDTA/EGTA處理過的薄的骨組織片能使得骨組織中成骨細胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將成骨細胞分離開來。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)新生兒或成年大鼠的成骨細胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個細胞的效率是已出版文獻中所報道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以大程度地降低所培養(yǎng)的成骨原代細胞中成纖維細胞的含量。 大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)大鼠的成骨組織細胞。本試劑盒包含： （）OptiTDSTM大鼠成骨細胞組織解離液（3×ml） （2）大鼠成骨細胞組織處理緩沖液（00ml） （3）FibrOutTM大鼠成骨細胞成纖維抑制劑（ml（500x）） （4）大鼠成骨組織洗液（5x00 ml） （5）大鼠成骨細胞生長因子（ml 500x）及血清（5x0ml） （6）大鼠成骨細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（5 x00ml） （7）大鼠成骨組織預(yù)備液（ x00 ml） （8）大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒使用說明書
培養(yǎng)步驟：
大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus

小鼠腸巨噬細胞*培養(yǎng)基00mL

人內(nèi)臟脂肪細胞*培養(yǎng)基00mL

茄腐鐮刀菌 Fusarium solani

Hepa -6, 小鼠肝細胞

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

桔橙小單孢菌 Micromonospora aurantiaca

大鼠神經(jīng)元細胞*培養(yǎng)基00mL

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

黑白輪枝孢

大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)3-(3-溴)吡分子式：234.092英文名稱：3- (3-) pyridine：4422-32-6分子量： CH8BrN

2-羥-3-硝-5-(三氟甲)吡分子式：208.09英文名稱：2- hydroxy -3- nitro -5- (three f) pyridine：33252-64-分子量： C6H3F3N2O3

2-嘧分子式：95.英文名稱：2- amino group：09-2-6分子量： C4H5N3

氨丙咪唑分子式：英文名稱：Ammonium group：分子量：

堿性品綠英文名稱：Basic green分子式：364.9分子量： C23H25ClN2：569-64-2

二甲萘分子式：56.22英文名稱：Two methyl naphthalene：28804-88-8分子量： C2H2

茶海明英文名稱：Dramamine分子式：499.95分子量： C7H2NO.C7H7ClN4O：523-87-5

人參皂甙Rc英文名稱：Ginsenoside Rc分子式：079.2685分子量：C53H90O22：02-4-0

3-(4-溴)-5-甲-H-吡唑分子式：英文名稱：3- (4-) -5- methyl -H-：45353-53-3分子量： C0H9BrN2

三乙氫硼鉀分子式：38.英文名稱：Three ethyl potassium：22560-2-0分子量： C6H6BK

注意事項：
. 接收到大鼠成骨細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。