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檢測ELISA試劑盒對牛乳中

  初步組裝試劑盒并對試劑盒的各組分的穩(wěn)定性進行了檢測和優(yōu)化，成功建立了能在6個月內維持穩(wěn)定的ELISA試劑盒，并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進行了測定。利用5C0雜交瘤細胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。采用包被抗原稀釋度∶3200，腹水抗體的工作濃度∶.6×05，尺度曲線線性方程為y=.0522-0.3276x(0～000ng/ml)，半數按捺濃度為93.22ng/ml，檢測限約為5ng/ml。氨基糖苷類抗生素是一類應用廣泛的廣譜抗菌藥物，主要包括(SM)、(GM)、(KM)等，對奶牛乳房炎、等有很好的療效，常用作獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。對患乳房炎奶牛進行肌肉打針和乳房給藥治療，采用本試劑盒測定牛奶中的殘留濃度，證明用藥后牛奶的廢棄期分別為至少2d和4.5d。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5種人工抗原，從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進行比較，*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原，通過雜交瘤技術獲得株能不亂分泌抗特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株5C0。通過實驗比較了5種樣品處理方法，選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。為探索一種能夠快速有效的檢測牛奶中殘留的方法，本研究采用單克隆抗體技術和酶聯(lián)免疫吸附測定等技術，合成人工抗原，制備出抗單克隆抗體，建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法，組建成快速檢測ELISA試劑盒并進行了優(yōu)化和實際應用。