原代細(xì)胞的分離方法
點(diǎn)擊次數(shù):942 更新時(shí)間:2016-04-20
①過夜冷消化 將取得的組織用 Hanks 液洗三次,剪成碎塊大小為 4 毫米左右,用 Hanks 液洗 2~3 次以除去血球和脂肪組織,再加入 0.25% 的,搖勻后放 4℃過夜,次日再用 Hanks 液洗滌,棄去上清,共洗 2~3 次,然后,加入少量營(yíng)養(yǎng)液吹打分散,細(xì)胞計(jì)數(shù),按適當(dāng)?shù)臐舛确制颗囵B(yǎng)。
②多次提取消化法 多次提取消化法有以下三種:
熱消化多次提取 -- 將剪碎的細(xì)胞塊加入 0.25% 37℃水浴中消化 5~20 分鐘,然后經(jīng)洗滌后用營(yíng)養(yǎng)液分散制成細(xì)胞懸液,按合適的濃度分瓶培養(yǎng),然后將留下的未*消化的組織按上述方法操作,再消化提取細(xì)胞。
冷消化多次提取 -- 方法同上,只是消化溫度為 4℃。
先熱消化后冷消化 -- 將組織塊先用于 37℃下消化 20 分鐘經(jīng)洗滌后用營(yíng)養(yǎng)液分散,制成懸液,剩余未消化的小組織塊經(jīng)洗滌后用于 4℃下過夜,次日再提取細(xì)胞,分散成懸液,分瓶培養(yǎng)。